来源：
2026-06-04
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文章亮点
BPS bioscience PARPtrap Assay kit基于荧光偏振技术检测DNA损伤修复核心物质PARP是否被"锁死"在DNA上，从而评估PARP抑制剂的真正杀伤机制，其产品优势同时在于可高效区分PARP抑制剂对PARP1或PARP2的选择性。
背景介绍：
聚ADP核糖聚合酶（Poly-ADP Ribose Polymerase，PARP）是一个由17个成员组成的大型蛋白质家族，是DNA损伤反应（DDR）的关键起始者，PARP1-PARP3特异性参与损伤感知、损伤部位修复蛋白的招募和激活、细胞死亡，PARP1和PARP2主要参与DNA修复。由于PARP1在DNA受损无法修复时能够改变转录并诱导细胞凋亡，因此可能作为治疗靶点发挥更显著的作用。
↑ DNA损伤修复
01 PARP修复DNA损伤机制
以及PARP干扰机制
1. 感知损伤
当DNA单链断裂后，PARP1通过N端的DNA结合域（DBD）识别断裂位点，两个锌指结构（ZnF1/ZnF2）与DNA缺口两侧结合，PARP1构象发生改变，催化域（CAT）激活。
2. 合成信号分子
激活的PARP1以NAD为底物，催化PAR链合成，PAR链带大量的负电荷，形成分子海绵效应。
3. 招募修复机器
PAR链作为分子平台，通过静电作用招募带正电荷的修复蛋白，这些蛋白通过PAR结构域识别PAR链。XRCC1支架蛋白是核心组织者，招募DNA聚合酶β（Pol β）填补缺口，DNA连接酶III（Lig III）连接断端，PNKP/APE1处理末端。
4. PARP1解离与修复完成
PAR链负电荷积累，产生静电排斥后，PARP1从DNA上解离，修复蛋白占据断裂位点完成缺口填补和连接，PARG酶（聚ADP核糖水解酶）降解PAR链，随后PARP1恢复静息状态，开启下一轮修复。
在首个PARP抑制剂进入临床开发约十年后，人们发现除了阻断PARP1的酶活性外，PARP抑制剂还能将PARP锁定在DNA上。在PARP抑制剂的作用下，当PARP1与DNA结合后，PARP1无法合成PAR从而“锁死”在DNA上，修复蛋白无法被招募，从而导致断裂持续存在，进一步形成DSB，最终导致细胞死亡。也就是说PARP抑制剂让PARP"赖着不走"，把信号步骤变成致死陷阱。
↑ 图示：PARP DNA损伤修复以及PARP干扰机制
目前，美国已经有4种PARP1/2抑制剂用于临床，中国两种获批，还有许多其他药物正在进入（临床前阶段）。
↑ 图示：临床使用的PARP抑制剂
获批药物通过与NAD结合竞争并阻止自身PARy化，从而降低PARP1和PARP2的活性，导致其未能从DNA上脱离。PARP持续存在于损伤部位，阻碍修复并阻止复制，导致细胞死亡。因此，捕获PARP到DNA上的药物通常比捕获能力较弱的PARP抑制剂具有显著更高的细胞毒性。
在四种抑制PARP1/2的临床药物中，有三种在捕捉PARP1和PARP2的效力上有所不同，无论它们抑制PARP催化活性的效力如何。事实上，这类药物的细胞毒性效应及其临床疗效似乎与它们捕获PARP蛋白到受损DNA上的效率相关，PARP蛋白起到细胞毒药的作用。
↑ 图示：PARP抑制剂在已知捕获DNA能力方面提升临床疗效
此外，将PARP1捕获到DNA而未捕获PARP2会导致细胞毒性增加。因此，筛查此类抑制剂应包括定量PARP捕获能力并区分抑制剂对PARP1或PARP2选择性的检测。
然而，目前大多数商业化的PARP检测方法测量其酶活性，并量化靶蛋白如组蛋白的PARyl化。相比之下，BPS bioscience PARPtrap™ 检测测量的是化合物将PARP1或PARP2留在DNA探针上的能力，而不是测量其对PARP酶活性的影响。
02 BPS bioscience PARPtrap™
检测试剂盒检测原理
核心逻辑：检测PARP是否被"锁死"在DNA上
检测原理：荧光偏振原理
检测机制：PARPtrap™通过荧光偏振检测"分子旋转速度"，PARP被抑制剂锁死在DNA上→复合物变大→旋转变慢→偏振信号升高。偏振信号（FP）升得越高，“锁死”能力越强。
↑ PARPtrap测定原理示意图
检测优势：
操作简单，无需洗涤
检测速度快，3h
支持96 tests/384tests
可用于检测PARP1和PARP2的复合效力差异
03 PARPtrap Assay kit能高效区分
抑制剂对PARP1或PARP2的选择性
实验目的：对比已知抑制剂在捕获PARP1和PARP2中效力
实验方案：PARP1捕获（左）和PARP2捕获（右）在Talazoparib, Olaparib, Veliparib, and AZD5305浓度递增的情况下，分别使用PARPtrap™ ASSAY Kit for PARP1（#80584）和PARP2™ Assay Kit（#78296）进行测量。“No Compound”对应测定允许的最低FP，“No NAD+”对应检测允许的最高FP。
实验结果：EC50结果显示，Talazoparib, Olaparib and Veliparib对PARP1和PARP2的捕获效果相似，而AZD5305在捕获PARP1方面比PARP2高效1000倍，显示出PARP1与PARP2之间的选择性。
实验结论：通过定量PARP捕获能力，检测可以区分抑制剂对PARP1或PARP2的选择性，从而为哪种抑制剂更具细胞毒性提供策略。
04 BPS bioscience基于
PARP的 DNA损伤修复检测产品推荐
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