抗体和系列免疫检测技术全解析（五）：免疫检测试剂罗列和挑选

抗体和系列免疫检测技术全解析（五）：免疫检测试剂罗列和挑选

来源：

2025-02-11

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第五篇：免疫检测试剂罗列和挑选

前言

在前四篇推文中，我们聊了免疫检测技术的基础原理，比如抗原和抗体是怎么“认出”彼此的，显色反应是如何发生的，以及信号放大到底是怎么个放大法。

我们还盘点了传统和新兴的免疫检测技术，看看它们各自适合干什么。本篇就不再讲理论了，我们要“下实验室”，聊聊免疫检测中那些不可或缺的关键试剂，告诉大家它们是做什么的、怎么选才靠谱。

5.1 免疫检测实验中常用试剂罗列

1、一抗（Primary Antibodies）

简单来说，一抗就像个“侦探”，专门去识别和绑定你想要检测的目标分子（抗原）。它们有“火眼金睛”，只盯着特定的抗原不放。一抗的作用在于，找到目标抗原并牢牢绑定，是整个免疫检测的核心环节。没有它，后面的显色啥的都没戏。

2、二抗（Secondary Antibodies）

二抗很多时候，就像一抗的“助攻”，它不直接抓抗原，而是识别一抗，再附带一个“放大器”（比如酶或荧光染料）。因为二抗可以同时绑定多个一抗，因此将酶或者荧光染料放在二抗上，能将最后检测到的信号，进行有效放大。因此，二抗在免疫检测中的作用在于增强信号，提升灵敏度。常见的类型有酶标二抗（HRP、AP）、荧光标记二抗（FITC、PE）、金标二抗等。

3、酶（Enzymes）和底物（Substrates）与显色试剂

免疫检测中，通常将酶和抗体进行偶联。抗体进行特异性结合，而酶催化底物显色或发光，让你能直观地看到实验结果，产生信号。比较常用的酶有HRP（辣根过氧化物酶）和AP（碱性磷酸酶）。

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图：TMB显色原理

其中HRP（辣根过氧化物酶）和TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）等底物搭配，能产生蓝色或黄色反应，特别灵敏，常用于ELISA、WB。

HRP（辣根过氧化物酶）和DAB（3,3'-二氨基联苯胺）反应后产生棕色沉淀，常用于免疫组化（IHC）。

AP（碱性磷酸酶）和BCIP/NBT底物反应显蓝紫色，适合背景噪声要求高的实验。适合免疫印迹（WB）。

4、荧光素（Fluorophores）

除了通过酶催化产生显色反应外，还可以给抗体加上荧光素，通过给抗体打上“荧光标签”，可以方便在荧光显微镜下直接观测到有那些抗体与代价测抗原进行了结合。

常见荧光素：FITC（绿色荧光）、PE（橙红色荧光）、Cy5（远红外荧光）等

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图：检测抗体偶联荧光素

5、偶联试剂（Conjugation Reagents）

如此前免疫检测原理中所介绍，抗体能够结合抗原，但是免疫检测中使用的抗体需要与酶或者荧光试剂进行偶联结合，才能将不可见的信号，变成可检测的信号。

常见偶联剂有SMCC（交联抗体和酶的“化学小帮手”）、EDC/NHS（把抗体和小分子底物“粘”在一起）。

5.2 免疫检测抗体的生产和挑选

在免疫检测试剂中，抗体是核心试剂。根据不同的生产工艺，免疫检测的抗体可以分成单克隆抗体，多克隆抗体和重组抗体不同类型。

在此之前我们先补习一下抗体的基因重排，从而帮助我们更好地理解单克隆抗体、多克隆抗体和重组抗体的差异性。

1、抗体基因的免疫重排原理

在免疫反应中，抗体的多样性来源于免疫系统中的B细胞通过一种叫做“免疫重排”的过程来生成不同的抗体。每个抗体由两部分组成：重链和轻链，这些链条是由基因编码的。为了产生能够识别不同抗原的抗体，B细胞的基因会通过一种称为“V(D)J重排”的机制进行重新组合。

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图：抗体VDJ基因的重排

在这个过程中，位于重链和轻链基因中的不同“基因片段”（V片段、D片段和J片段）被随机选择并组合，形成一个完整的抗体基因。这种基因重排是随机的，能够产生较大的抗体库，使得每个B细胞产生的抗体具有独特的结合特性，可以识别不同的抗原表位。

当B细胞接触到外来抗原时，它们会被激活并增殖，产生较多相同抗体分子（克隆）。这些抗体能够特异性地结合抗原，从而发挥免疫作用。值得注意的是，免疫重排的随机性使得每个B细胞的抗体特异性是独一无二的，这也是为什么我们的免疫系统可以应对各种不同的病原体。

而很多时候，天然的抗原具有不同的表位，因此一个抗原进入体内后，会产生很多种不同的抗体，也就是通常所说的多克隆抗体。

2、免疫检测抗体的不同类型

（1）单克隆抗体（mAb）：抗原免疫机体后，取中一个B淋巴细胞，和骨髓瘤细胞融合。得到永生化的单个B细胞后，生产得到的抗体是单克隆抗体。由于来源于一个细胞，所以单克隆抗体的特异性超强，适合准确检测。

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（2）多克隆抗体（pAb）：抗原免疫机体后，收集上清，得到的来自多个B细胞生产的抗体。因此能识别抗原的不同表位，灵敏度更高。

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（3）重组抗体：通过基因工程技术合成抗体序列编码基因，并转染到抗体表达细胞系中生产的抗体称之为重组抗体。重组抗体的特异性和一致性都在线，适合高端检测或药物开发。

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5.3 不同免疫检测技术的抗体选择指南

● ELISA：ELISA实验中，一般情况下建议用特异性高的单克隆抗体做捕获抗体，用信号更强的多抗作为检测抗体，两者组合起来效果更好；

● Western Blot：为了可以识别变性蛋白的多个表位，一般情况下建议使用多抗，可以使信号更明显；

● 流式细胞术：流式技术中，一般使用的荧光标记抗体都是单克隆抗体；

● 免疫组化（IHC）：IHC实验选择抗体时要考虑组织固定和抗原修复后的特异性，一般都建议选择生产厂家验证过的IHC专用抗体；

● 免疫沉淀（IP/Co-IP）：选择高亲和力的抗体，确保能有效拉下目标蛋白及其相互作用伙伴。

以上，我们为大家汇总了免疫检测试剂经常需要用到试剂。免疫检测试剂中的抗体由于来源物种多样，使用场景不同，经常需要耗费使用人很多时间进行挑选。

下个章节我们将为大家介绍国内外免疫检测试剂优秀的厂家，方便大家在下次需要的时候，能够快速进行挑选。

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