RSV专题（四）| 呼吸道合胞病毒中和抗体检测

来源：

2025-01-16

在之前的3篇文章中，我们分别介绍了呼吸道合胞病毒（RSV）的结构特点、药物和疫苗的研发进展、感染机制及其研发过程的AlibioBuy配套解决方案（点击查看第3期详情）。在RSV感染过程中，特异性中和抗体是其感染的主要保护机制。目前，RSV 中和测定已成为临床前动物模型、流行病学研究和临床试验中评估血清抗体中和活性的关键功能方法。今天，我们来详细介绍RSV的多种中和抗体检测方法。

斑减少中和试验（PRNT）

斑减少中和试验是中和检测抗体的金标准。RSV病毒与稀释后的血清进行混合后，RSV感染扩散杀死周围细胞进而形成空斑。当被感染细胞能够产生中和抗体时，抗体与RSV结合，阻止RSV感染细胞，那么空斑的数量就会减少。因此通过定量测量感染细胞形成的空斑，可以获得中和抗体对RSV感染宿主细胞的病理影响。

1. 优点：高特异性，能够模拟RSV病毒感染的过程，具有较高的特异性和准确性。

2. 缺点：周期长，操作条件要求高、成像高、通量低等。

微量细胞中和试验（MNT）

微量细胞中和试验（MNT）类似于PRNT，其原理是基于RSV病毒感染细胞后引起的细胞病变效应（CPE）衡量中和抗体的活性。当RSV病毒感染宿主细胞时，会在易感细胞层上引起细胞的形态学变化，如细胞圆化、脱落、死亡等。如果存在中和抗体，则抗体与RSV病毒结合，阻止RSV进入易感细胞，从而减少或者抑制CPE的发生。

1. 缺点：周期长，灵敏性低于PRNT。

2. 优点：高通量筛选，可用于大规模筛查，操作简单。

AlibioBuy提供用于RSV感染的PRNT和MNT两种研究方法所用到的RSV毒株以及RSV易感细胞株。

表1：AlibioBuy代理的RSV毒株及其易感细胞（部分）

品牌	产品名称	货号	产品类型
Viratree	RSV-GFP1	R121	B1菌株
Viratree	RSV-RFP1	R131	A2菌株
Viratree	RSV-GFP1-Luc2	R141	A2菌株
Viratree	bRSV-GFP1	R221	菌株 ATue51908
Viratree	RSV-GFP5	R125	A2菌株
Viratree	RSV-DsRed5	R135	A2菌株
Viratree	RSV-FarRed5	R155	A2菌株
Viratree	RSV-Luc5	R145	A2菌株
Viratree	RSVB-GFP3	R423	B1菌株
BPS Bioscience	PBMC	79059	Frozen（2M/10M/30M/100M）
Cell Biologics	Human Primary Bronchial Epithelial Cells	H-6033B	Frozen

微量病毒中和试验（ELISA/MSD检测方法）

微量病毒中和试验（Micro Neutralization Assay, MNT）结合ELISA（酶联免疫吸附试验）或MSD（电化学发光法）用于检测RSV蛋白含量。

MNT部分基于病毒感染细胞后引起的细胞病变效应（Cytopathic Effect, CPE）或病毒复制情况来衡量中和抗体的活性。ELISA/MSD通过检测感染后细胞分泌或表达的特定病毒蛋白（如RSV F蛋白或N蛋白），定量分析RSV的蛋白含量，从而间接反映RSV的感染水平。

图：RSV微孔病毒中和后检测病毒蛋白含量

优势：能够同时评估中和抗体的活性和测量病毒感染后细胞分泌或表达的特定病毒蛋白。

AlibioBuy提供用于RSV感染的PRNT和MNT两种研究方法所用到的RSV毒株以及RSV易感细胞株。

表2：AlibioBuy代理的RSV蛋白及其ELISA试剂盒（部分）

品牌	产品名称	货号	产品类型
Mybiosource	Human respiratory syncytial virus,RSV ELISA Kit	MBS9304067	Sandwich ELISA
Krishgen biosystems	GENLISA Human Anti-Respiratory Syncytial Virus (RSV ) ELISA	KBH7819	Sandwich ELISA
Mybiosource	anti respiratory syncytial virus (RSV) antibody (IgG), ELISA Kit	MBS706585	ELISA
Mybiosource	Anti-Respiratory Syncytial Virus Antibody IgM (RSV-IgM), ELISA Kit	MBS704718	ELISA
Mybiosource	anti respiratory syncytial virus (RSV) antibody (IgG), ELISA Kit	MBS318531	Protein
Mybiosource	Respiratory Syncytial Virus (RSV) Fusion Protein, Monoclonal Antibody	MBS310162	Monoclonal Antibody
Mybiosource	RSV, Native Protein	MBS537476	Protein
Mybiosource	RSV, Monoclonal Antibody	MBS530518	Monoclonal Antibody
Mybiosource	RSV, Monoclonal Recombinant Antibody	MBS488274	Recombinant Antibody
Mybiosource	anti respiratory syncytial virus (RSV) antibody (IgG), ELISA Kit	MBS706585	ELISA
Mybiosource	RSV, Monoclonal Recombinant Antibody	MBS488273	Recombinant Antibody
Mybiosource	RSV, Polyclonal Antibody	MBS534024	Polyclonal Antibody
Mybiosource	Respiratory Syncytial Virus (RSV) Fusion Protein, Monoclonal Antibody	MBS310160	Monoclonal Antibody
Mybiosource	Respiratory Syncytial Virus (RSV), Polyclonal Antibody	MBS315205	Polyclonal Antibody
Mybiosource	Respiratory Syncytial Virus (RSV) Fusion Protein, Type A and B Strains, Monoclonal Antibody	MBS313144	Monoclonal Antibody
Abnova	Respiratory syncytial virus monoclonal antibody, clone J358	MAB13638	monoclonal antibody
Abnova	Respiratory syncytial virus monoclonal antibody, clone J359	MAB13639	monoclonal antibody
Abnova	VHH-His tag NanoAb Targeting Human RSV, clone UA01	NAB00048-M01J	NanoAb
Abnova	VHH-His tag NanoAb Targeting Human RSV, clone UA01 (FITC)	NAB00048-MF01J	NanoAb
Abnova	BRSV polyclonal antibody	PAB14559	polyclonal antibody
Abnova	RSV recombinant monoclonal antibody, clone RSHZ19 (Felvizumab)	RAB01177	monoclonal antibody

RSV病毒报告基因中和试验

一种评估血清样本中和抗体效价的高效体外实验方法。通过将荧光报告基因（GFP/Luciferase）插入RSV基因组中，使得病毒感染细胞后能够产生荧光信号。如果存在中和抗体，这些抗体会和病毒结合，阻止RSV感染细胞，减少或者抑制报告基因的表达。

AlibioBuy提供带有荧光素酶/GFP的RSV菌株，详情查看表1。

RT-qPCR方法进行RSV病毒载量检测

将RSV病毒的RNA逆转录为cDNA，然后对已知的特定基因片段进行扩增和实时荧光监测，从而实现对病毒载量的精确测定。

AlibioBuy提供用于PCR扩增进行的RSV A/B分型检测试剂盒。

表3：AlibioBuy提供的RSV分型检测试剂盒

品牌	产品名称	货号	产品类型
Geneproof	Covid-19/Flu/RSV GPack	FCOV2A/GPACK/100	real-time PCR

ELISPOT进行RSV抗原多肽

特异性T细胞反应检测

ELISPOT是一种灵敏性强的体外免疫学检测方法，主要用于评估抗原刺激下的T细胞反应。当T细胞受RSV多肽刺激后，被激活分泌包括INF-γ，IL2，IL6等细胞因子。ELISPOT利用报备在微孔板上的特异性抗体捕捉这些分泌物，通过酶促反应产生可见斑点，这些斑点代表分泌相应细胞因子的活化T细胞。

图：ELISPOT检测实验流程

AlibioBuy提供用于该检测方法的PBMC样本，RSV抗原多肽库、显色底物、细胞因子Elisa检测试剂盒（IL2、IL6、INF-γ）等产品，详情可查看表1、表2、表4。

表4：AlibioBuy提供的显色底物及细胞因子检测试剂盒

品牌	产品名称	货号	产品类型
Mossbio	HRP的不溶性底物	TMBM	100ml/500ml /1000ml
Mossbio	HRP的可溶性底物	TMBHK	100ml/500ml /1000ml
Mossbio	用于HRP的化学发光底物	ChemiHRP	100ml/500ml /1000ml
Mossbio	AP的可溶性底物	NPPD	50ml/100ml/ 500ml/1000ml
Mossbio	用于AP的不溶性底物	NBTM	100ml/500ml /1000ml
Mossbio	用于AP的化学发光底物	AP-RK	100ml/500ml /1000ml
Abnova	FastELISA IL-8 (Human) ELISA Kit	KA6989	Qualitative Sandwich ELISA
Mybiosource	Interleukin 6 (IL6), ELISA Kit	MBS2019894	Double-antibody Sandwich
Mybiosource	Interleukin 8 (IL8), ELISA Kit	MBS2019724	Double-antibody Sandwich
Mybiosource	Interleukin 8 (IL8), ELISA Kit	MBS454573	Quantitative Sandwich
Abnova	IL2 monoclonal antibody (M03), clone 3C8	H00003558-M03	ELISA
Abnova	IL2 monoclonal antibody (M11), clone 1C5	H00003558-M11	ELISA
Abnova	IL2 (Human) Recombinant Protein (P01)	H00003558-P01	Protien

总结

中和抗体检测是RSV疫苗和药效评估的重要方法。AlibioBuy提供RSV完整解决方案，包括从RSV相关动物模型构建到RSV检测，再到各种RSV蛋白抗体Elisa免疫检测等，加速您的药物及疫苗研发进展。

如需了解更多信息

欢迎联系小编

返回列表