呼吸道合胞病毒RSV作为一种严重的下呼吸道疾病病原体,通过黏膜传播,感染上呼吸道后可引发严重的肺炎和支气管炎(点击查看详情)。RSV感染导致的免疫反应既是病因,也是病毒清除的关键,因此深入解析RSV的感染过程对于疫苗和药物开发能够提供理论基础。
01
RSV的感染复制过程
RSV的复制合成包括吸附、融合、基因合成、组装、释放5大过程。支气管上皮纤毛细胞和肺泡I型肺细胞是RSV感染的主要靶细胞。
1. RSV的粘附G蛋白吸附在细胞表面,与细胞的表面受体结合,由F蛋白介导细胞和病毒的融合。
2. 病毒的核衣壳被释放到细胞质中。在细胞质内,RSV的L、P形成RNA聚合酶引导RSV转录。
3. 这些转录物被翻译成病毒的非结构蛋白和结构蛋白。新合成的病毒RNA与N蛋白结合,形成新的核衣壳。
4. 新的核衣壳移动到宿主细胞的细胞膜附近,与M蛋白相互作用,招募囊膜上的G蛋白和F蛋白,形成新的病毒颗粒。
5. 新形成的成熟的RSV病毒颗粒通过宿主细胞膜的出芽过程被释放到细胞外环境中。
图:RSV感染复制流程
基因工程改造的带有荧光标记的RSV病毒能够通过荧光显微镜实时观察病毒感染和复制的动态过程,进一步研究病毒在宿主细胞内的复制周期、病毒粒子的组装和释放。AlibioBuy代理品牌Viratree提供带有GFP/RFP/Luc/FarRed等基因工程改造的RSV病毒,能够适用于多种场景下的检测。
品牌 | 产品名称 | 货号 | 亲本菌株类型 |
Viratree | RSV-GFP1 | R121 | B1菌株 |
Viratree | RSV-RFP1 | R131 | A2菌株 |
Viratree | RSV-GFP1-Luc2 | R141 | A2菌株 |
Viratree | bRSV-GFP1 | R221 | 菌株 ATue51908 |
Viratree | RSV-GFP5 | R125 | A2菌株 |
Viratree | RSV-DsRed5 | R135 | A2菌株 |
Viratree | RSV-FarRed5 | R155 | A2菌株 |
Viratree | RSV-Luc5 | R145 | A2菌株 |
Viratree | RSVB-GFP3 | R423 | B1菌株 |
基于ELISA检测原理以及PCR扩增原理的RSV检测试剂盒能够定性/定量检测样本是否存在RSV的感染,AlibioBuy代理多种类型的RSV检测试剂盒。
品牌 | 产品名称 | 货号 | 产品类型 |
Mybiosource | Human respiratory syncytial virus,RSV ELISA Kit | MBS9304067 | Sandwich ELISA |
Krishgen biosystems | GENLISA Human Anti-Respiratory Syncytial Virus (RSV ) ELISA | KBH7819 | Sandwich ELISA |
Geneproof | Covid-19/Flu/RSV GPack | FCOV2A/GPACK/100 | real-time PCR |
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02
RSV的感染机制
RSV的感染是一个复杂的过程,RSV感染细胞后会引起机体产生固有免疫和适应性免疫。
1. RSV引起的固有免疫反应
RSV感染引起的固有免疫反应是通过模式识别受体识别RSV病毒的核酸和蛋白质,激活I型干扰素(INF)等细胞因子的分泌,从而抑制病毒的复制。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)、视黄酸诱导基因Ⅰ样受体(retinoic acid-inducible gene-Ⅰ-like receptor,RLR)和核苷酸诱导寡聚结构域样受体(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor,NLR)是RSV三大模式识别受体。
目前已经有十种不同的TLR,主要包括在细胞表面识别微生物膜成分的TLR1-6和在胞质核内体识别微生物的TLR3、TLR7-9。在RSV感染过程中,通过TLR激活核因子核因子-κB介导的固有免疫应答,从而分泌IL-6、IL-8和IL-10等细胞因子,以重塑炎症与抗炎的微环境。高灵敏的细胞因子Elisa检测试剂盒能够有效检测机体在RSV感染后引起的细胞因子表达水平变化。Alibiobuy提供RSV固有免疫反应过程中产生的多种细胞因子检测试剂盒。
品牌 | 产品名称 | 货号 | 产品类型 |
Abnova | FastELISA IL-6 (Human) ELISA Kit | KA6966 | Qualitative Sandwich ELISA |
Abnova | FastELISA IL-8 (Human) ELISA Kit | KA6989 | Qualitative Sandwich ELISA |
Mybiosource | Interleukin 6 (IL6),ELISA Kit | MBS2019894 | Double-antibody Sandwich |
Mybiosource | Interleukin 8 (IL8),ELISA Kit | MBS2019724 | Double-antibody Sandwich |
Mybiosource | Interleukin 8 (IL8),ELISA Kit | MBS454573 | Quantitative Sandwich |
2.RSV引起的适应性免疫
RSV感染引起的适应性免疫反应涉及T细胞和B细胞,T细胞通过细胞副作用和释放细胞因子直接杀伤RSV病毒,B细胞则通过产生中和抗体。参与RSV适应性研究的细胞亚型包括CD4+和CD8+T细胞、1型和2型辅助性T细胞(T helper cell,Th1/Th2)、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和17型辅助性T细胞(T helper 17 cell,Th17)、调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)。
Treg和Th17是参与适应性免疫应答的2个CD4+T细胞亚群,在Th17分泌的细胞因子IL-17作用下,趋化因子(如CXCL1)增加,招募过量的中性粒细胞,导致黏液分泌过多,从而阻碍其他免疫细胞对RSV病毒的有效清除。而Th17分泌的细胞因子IL-22则通过激活STAT3通路增强细胞自噬抑制人气道和肺泡上皮细胞中RSV的复制。
此外,在RSV结构蛋白F的作用下,nBreg的趋化因子受体CX3CR1表达上调,并与RSV结构蛋白G结合,产生抗炎因子IL-10后抑制Th1型细胞因子产生,从而阻碍Th1型细胞应答,降低病毒清除率。
品牌 | 产品名称 | 货号 | 产品类型 |
Abnova | CXCL1 (Human) ELISA Kit | KA3337 | Sandwich ELISA |
Mybiosource | CCRL1, ELISA Kit | MBS2513874 | Sandwich ELISA |
Mybiosource | Fractalkine, Active Protein(CX3CL1) | MBS539569 | Sandwich ELISA |
03
RSV药物筛选探索
在RSV的药物筛选过程中,往往需要选择合适的RSV易感细胞进行培养,通过CCK-8法检测细胞活力,确定筛选体系的感染滴度。然后通过在不同的时间节点提供不同给药方式确定药物对RSV病毒的抑制效果,最后通过PCR或者ELISA免疫荧光检测RSV感染后关键细胞因子(如IL-6、IL-1β、TNF-α、TLR-3、RIG-Ⅰ、IFN-β、ErbB1和ErbB2)的表达水平变化确定药物效果。
目前,国内针对RSV的预防和治疗研究近些年取得了一定进展,无论采用何种研发路径,高质量的工具是RSV研发的催化剂。AlibioBuy代理各种RSV研发所需要的工具,包含带有GFP等各种基因工程改造毒株的RSV病毒,RSV毒株分型检测试剂盒,以及RSV的F蛋白和G蛋白及其Elisa试剂等产品。
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