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PAIA Biotech 微孔板检测原理及应用
1、PAIA Biotech高通量抗体滴度筛选试剂盒
PAIA Biotech设计了一款底部具有独特凸起的微孔板,目的是允许捕获珠沉淀在荧光读数无法读取的区域。PAIA Biotech高通量抗体滴度筛选试剂盒(货号:PA-104;PA-105)包含功能化的磁珠和用于检测的荧光标记物,检测时在板中预先加入带有Fc结构的微球,由于微孔板中间突起,在重力作用下微球位于孔板底部。
随后向微孔中加入带有荧光基团的proteinA和样本进行混匀。样本中的抗体会和带有荧光基团的proteinA结合后存在溶液中。未被样本中抗体结合的proteinA分子将被带有Fc结构的微球结合,并沉淀于微孔底部,通过在微孔板进行荧光标记检测,基于荧光值的大小即可判定样本中抗体滴度。
图:PAIA试剂盒工作流程
2、PAIA Biotech抗体糖基化检测
治疗性抗体的糖基化是一个关键的质量属性(COA),它影响药物的稳定性、聚集、血清半衰期和免疫原性。因此,抗体糖基化检测对于抗体药物的研发、质量控制以及疾病诊断等领域具有重要意义。
PAIA Biotech的抗体糖基化试剂盒(货号:201,203)同样基于PAIA Biotech中间突起的微孔板,将样品(如抗体或糖蛋白)加入PAIA的微孔板中,孔内预包被了特异性糖结合分子(如凝集素),这些分子可特异性识别并结合到目标糖基(如甘露糖、半乳糖、唾液酸等)上。随后加入带有荧光标记的二抗或其他荧光探针,特异性识别与目标糖基结合的分子。利用荧光读板仪读取荧光信号,荧光强度与样品中糖基的丰度呈正相关。
图:PAIA糖基化检测
3、PAIA Biotech抗体错配检测
错配是在生产双特异性抗体和其他复杂分子时面临的巨大挑战,是指双特异性分子的重链和轻链错误地相互配对,错配异常会导致抗体结构异常进而影响其稳定性,在生物制药和抗体药物开发过程中,抗体错配(mismatch)是一个常见的问题,尤其在抗体筛选、生产和质控阶段。
PAIA Biotech抗体错配检测试剂盒(货号:401),借助中间具有突起的独特微孔板,基于不同的PH下错配和正确配对的抗体对离子交换磁珠的不同结合能力进行检测。抗体在低pH值下完全附着在珠上(左),在高pH值下被释放(右)。在反应完成后可以根据不同的荧光数据,依次判定样本中抗体的错配情况。
4、PAIA Biotech抗体聚集分析
评估和控制生物制剂的聚集对于确保生物制品的安全性和有效性至关重要。聚集已被认为是现代治疗方式(如双特异性抗体和Fc融合蛋白)的主要问题。抗体聚集体的产生可能会影响药物的安全性、稳定性和有效性。抗体药物开发,质量控制(QC),工艺优化流程都需要进行抗体聚集检测分析。
PAIA Biotech的抗体聚集检测(货号:301)采用了其独特的荧光微孔板检测技术,利用特异性配体(如捕获抗体或结合分子)在微孔板中捕获抗体聚集体,并通过荧光标记的二抗对其进行可视化检测。
将抗体样品加入特定配体包被的微孔板中,聚集体会优先与捕获分子结合,加入荧光标记的二抗,二抗与捕获的抗体聚集体结合,产生可检测的荧光信号,荧光检测仪对每个孔的荧光强度进行读取,荧光强度的高低与抗体聚集体的数量成正比。
5、PAIA Biotech抗体的非特异性和多特异性检测
越来越多的证据表明生物制剂的非特异性和多特异性检测是药物发现和开发中越来越重要的方面,表面疏水性和表面电荷已被确定为最不利的两种分子特征。
PAIA Biotech基于独特的微孔板技术推出的高通量检测方法使用化学定义的微珠检测候选药物与疏水(HIC-like)和负电荷(CEX-like)表面的结合,以评估非特异性结合,通过卵白蛋白(OVA)装载的珠子作为多特异性预测的指标,而带有肝素的珠子(HEP)进行胞饮评估以了解细胞抗体如何被细胞摄取,整个检测过程时间<45min,检测样本多达384个。
图:PAIA DEV检测试剂盒
5.1 PAIA Biotech抗体表面电荷检测
抗体表面电荷是影响抗体稳定性、可溶性和药代动力学特性的关键因素。电荷的变化可能导致聚集、吸附和效价下降。PAIA Biotech抗体表面电荷检测技术(货号:PA-DEV-CEX-01)以其高通量、自动化友好和低样本消耗等优势,为抗体表面电荷的快速检测提供了一种高效解决方案,能够显著提高抗体药物开发和生产过程中的检测效率。
5.2 PAIA Biotech抗体表面疏水性检测
PAIA抗体表面疏水检测技术(货号:PA-DEV-HIC-01)利用化学定义的疏水性微珠(HIC-like beads)来评估抗体的表面疏水性。这些微珠能够与抗体的疏水区域特异性结合,结合程度与抗体的疏水性成正比。通过微孔板底部的荧光读取器检测荧光信号。荧光信号越弱,表示抗体与疏水性微珠结合越强,表面疏水性越高。
5.3 PAIA Biotech抗体多特异性检测
PAIA抗体多特异性检测技术(货号:PA-DEV-OVA-01)主要用于评估抗体是否能够与多种不同的抗原或非特异性靶标结合,这对于抗体药物开发具有重要意义,尤其是在筛选和优化抗体候选药物时。PAIA抗体多特异性检测试剂盒使用有荧光标记的卵清蛋白(Ovalbumin)进行抗体多特异性评估。
5.4 PAIA Biotech抗体胞饮检测
抗体药物(如单克隆抗体)需要通过胞饮作用进入细胞内部,才能发挥其治疗效果(例如靶向细胞内信号通路或递送药物)。肝素被认为是为胞饮的标志,PAIA Biotech抗体胞饮检测试剂盒(货号:PA-DEV-HEP-01)使用包有肝素的bead(HEP)检测胞饮作用,进而评估抗体的细胞内化效率,从而优化药物设计。
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PAIA Biotech “全方位”抗体检测试剂盒优势
1. 通量高,384孔板支持一次上百个抗体样本检测
2. 快速检测,1小时内完成
3. 无需复杂仪器,操作简单
4. 无多步洗涤操作,节省人力
5. 检测灵敏度高,重复性强,结果稳定
6. 样品用量少,节约成本
7. 适合抗体开发中的早期筛选
与传统的ELISA检测、HPLC、SPR等抗体检测方法相比,PAIA Biotech 微孔板技术具有更快、更简便、更高效的优势,更加适用于规模生产和GMP环境中的批量检测;更多信息欢迎咨询泉心泉意!
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