打破传统，抗体检测的神 | PAlA Biotech高通量抗体解决方案

来源：

2024-12-10

抗体已成为当代生物医药重点组成部分，而在抗体药物研发生产过程中，一种打破传统，更高通量、更快速的抗体滴度检测、错配分析、聚集程度检测、糖基化分析、表面疏水性检测、表面电荷检测、多特异性检测及胞饮作用检测方法的应用，将进一步提高抗体行业的发展。

PAlA Biotech基于其专有微孔板技术开发的系列检测试剂盒，正是这样一种打破传统的好产品。PAlA Biotech目前已推出多条产品线，可用于抗体发现的成药性检测，高通量错配、聚集、游离寡糖和滴度分析。此外，PAIA Biotech还提供聚糖筛选分析服务，可以满足细胞培养实验室的样本数量和周转要求。

01 PAIA Biotech 微孔板技术原理

我们以高通量抗体滴度筛选试剂盒为例，来进行PAlA Biotech的系列检测试剂盒原理说明。

PAlA Biotech在中间突起的孔里预先加入微球，微球上带有Fc结构。由于微孔板中间突起，因此在重力作用下微球位于孔板底部。向微孔中加入带有荧光集团的proteinA，然后加入样本，并进行混匀。样本中的抗体分子会和带有荧光集团的proteinA结合，并存在溶液中。而未被样本中抗体结合的proteinA分子将被带有Fc结构的微球结合，并沉淀于微孔底部。

透过微孔板底部进行荧光分析，基于荧光值的大小即可判定样本中抗体滴度的大小。

基于此原理，PAlA Biotech还开发了抗体错配分析、聚集程度检测、糖基化分析、表面疏水性检测、表面电荷检测、多特异性检测及胞饮作用检测系列试剂盒。这些基于微孔法的检测试剂盒，相对于传统的检测方法，通量更大、检测速度更快，并且可以兼容自动化系统，节省更多人力成本。

02 PAIA Biotech 产品应用介绍

应用场景一：抗体滴度检测

一、检测原理：如上文介绍

二、传统抗体检测方法：

1 酶联免疫吸附测定（ELISA）

● 原理：利用抗原-抗体的特异性结合，结合酶标二抗和显色反应，通过比色法检测抗体浓度

● 优点：灵敏度高，适用于低浓度的抗体检测

● 缺点：操作步骤繁琐，耗时长，洗涤和孵育时间较长，且结果易受实验人员操作的影响，难以实现高通量

2 高成效液相色谱 (HPLC) - 蛋白A亲和色谱

● 原理：使用Protein A亲和色谱柱，通过抗体的Fc区与Protein A的结合特性分离和定量抗体

● 优点：灵敏度高，特异性强，尤其适用于纯化过程中的抗体浓度检测

● 缺点：设备昂贵，操作复杂，检测周期长，无法高通量操作

3 表面等离子共振（SPR）

● 原理：利用表面等离子共振技术，实时监测抗原-抗体结合的动力学变化，从而定量检测抗体滴度

● 优点：可实时监测，数据稳定，能够测定结合动力学参数

● 缺点：设备昂贵，操作复杂，样品用量大，难以高通量处理

4 电泳 / Western Blot

● 原理：通过SDS-PAGE分离蛋白质，然后用抗体与蛋白结合，并通过化学发光或显色系统检测抗体的存在

● 优点：可分析抗体的分子量和结构信息，操作方法成熟

● 缺点：无法准确定量，操作耗时，灵敏度不高，重复性差，难以高通量检测

5 紫外-可见分光光度计（UV-Vis）

● 原理：通过在 280 nm 处检测抗体溶液的吸光度（A280）来定量蛋白质浓度

● 优点：快速、简单、无损伤，适用于大范围的在线监测

● 缺点：特异性差，无法区分抗体与其他蛋白质，难以高通量操作

6 毛细管电泳（CE-SDS）

● 原理：通过电泳分离蛋白质，结合SDS，定量检测抗体浓度

● 优点：高分辨率，可同时检测抗体的纯度和分子量

● 缺点：仪器昂贵，操作复杂，无法高通量检测

三、PAIA biotech与传统方法的对比总结

总的来说，其与传统方法相比，更快、更简便、更高效，尤其适用于规模生产和GMP环境中的批量检测。

应用场景二：抗体糖基化分析

一、检测原理：

同样基于中间突起的微孔板，将样品（如抗体或糖蛋白）加入PAIA的微孔板中，孔内预包被了特异性糖结合分子（如凝集素），这些分子可特异性识别并结合到目标糖基（如甘露糖、半乳糖、唾液酸等）上。加入标记了荧光的二抗或其他荧光探针，特异性识别与目标糖基结合的分子。利用荧光读板仪读取荧光信号，荧光强度与样品中糖基的丰度呈正相关。

二、传统糖基化检测方法：

1 高成效液相色谱-糖肽分析

(HPLC-Glycan Profiling)

● 原理：先对抗体进行酶解，释放出N-糖或O-糖后，使用荧光标记法标记糖基，再通过HPLC分离糖基，并检测其荧光信号

● 优点：可以准确分析和定量目标糖基的组成和丰度，分离度高

● 缺点：流程繁琐，操作复杂，通常需要1-2天才能完成，成本高，无法高通量处理

2 质谱检测 (LC-MS/MS, MALDI-TOF-MS)

● 原理：将抗体的糖基分离后，采用**液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）或基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）**检测糖基的质量和序列

● 优点：可以提供高分辨率的糖基结构信息，能够区分同分异构体，精确度高

● 缺点：设备昂贵，技术要求高，数据解析复杂，无法大规模高通量筛选，检测周期长（通常2-3天）

3 毛细管电泳 (CE-LIF) - 荧光标记糖基法

● 原理：将糖基通过荧光标记后，利用毛细管电泳在电场中分离糖分子，使用激光诱导荧光（LIF）检测信号