生物药研发是一个多阶段、高复杂度的系统工程，细胞株开发和上游工艺开发是决定药物质量和生产效率的关键环节。然而，CHO细胞生产的克隆蛋白表达量和质量差异显著，Fc融合蛋白凭借独特的生物学活性和治疗潜力，已成为多种疾病治疗的重要方向，而糖基化修饰是影响Fc融合蛋白药代动力学、安全性和疗效的关键质量属性，其精准调控是药物研发过程中的核心难题。

PAIA biotech产品示意图

PAIA糖基化筛选技术以“夹心免疫分析”为核心原理，基于PAIA biotech独有的底部带有凸起的384孔板，通过Fc特异性捕获磁珠结合分析物，再利用荧光标记的凝集素特异性结合目标糖基，最终通过检测未结合凝集素的荧光信号，实现糖基化水平的快速定量。

PAIA Glycan assay Fc检测原理示意图

PAIA糖基化筛选在专用的384孔板中进行，分为四个关键步骤：

• 向孔中加入标记凝集素和样品

• 混合形成磁珠-分析物-凝集素复合物

• 磁珠沉降

• 检测未结合标记物的荧光强度

  
  

PAIA biotech 糖基化流程示意图

这种设计不仅实现了磁珠与反应体系的高效分离，还能通过阴性对照校准，确保检测结果的准确性。

1. 高通量检测：

单次可检测24个样本（4种凝集素）、48个样品（2种凝集素）、96个样品（1种凝集素），远超HILIC（24-48个样品）和MS（12-24个样品）的检测通量，大幅提升筛选效率。

2. 快速周转：

检测周期仅需4-6小时，而传统MS和HILIC方法需要2-7天，能够快速反馈结果，加速决策进程。

3. 样品处理简便：

无需复杂的样品前处理，甚至可直接使用粗上清液进行检测，省去了Protein A纯化步骤，进一步缩短检测时间。

4. 稳定性可靠：

以分子参考标准（RS）作为内参，在9次检测中表现出良好的一致性，标准偏差仅为0.007，证明检测结果精准可信。

为验证PAIA技术的实用性，研究团队在细胞株开发和上游工艺开发的多个关键场景中进行了测试，均取得了理想效果。

在ambr250生物反应器的工艺研究中，团队基于PAIA biotech技术测试了25、50、100和200μg/mL四种样品浓度。结果显示，200μg/mL时所有样品的凝集素结合信号均大于0.1，且信号-噪声比最优，因此确定该浓度为最佳检测浓度。同时，PAIA技术与HILIC检测的总唾液酸化水平相关性高达R²=0.95，证明其检测结果与传统方法高度一致。

PAIA biotech高通量糖基化试剂筛选样本浓度

2. 细胞株-补料组合筛选

在ambr15的细胞株开发实验中，对6个克隆在3种补料条件下的唾液酸化水平进行检测。结果快速识别出克隆1-补料3、克隆3-补料2等多个与参考标准（RS）唾液酸化水平接近的优质组合。此外，还发现克隆2和6的唾液酸化水平在不同补料条件下相对稳定，而其他克隆则表现出明显的补料依赖性，为后续工艺优化提供了关键数据。剔除异常值后，PAIA与HILIC的相关性达到R²=0.889，进一步验证了其准确性。

对比PAIA检测与HILIC检测总唾液酸化度

3. 粗上清液直接检测验证

为进一步简化检测流程，团队对比了粗上清液和Protein A纯化样品的PAIA检测结果。发现除个别样品外，两者的凝集素结合信号差异极小，且粗上清液与HILIC的相关性（R²=0.974）甚至高于纯化样品（R²=0.93）。这表明粗上清液中的杂质不会干扰检测，PAIA技术可直接用于未纯化样品的快速筛选，大幅缩短检测周期。

PAIA biotech技术检测粗提物和纯化样品的凝集素结合比较

PAIA糖基化筛选技术凭借高通量、快速、简便、可靠的核心优势，成功解决了生物药研发中糖基化快速筛选的行业痛点。在细胞株开发阶段，它能快速筛选出优质克隆和补料组合，减少无效克隆的进一步开发；在 upstream 工艺开发阶段，可实时监控工艺参数对糖基化的影响，加速工艺优化进程。

通过与传统HILIC技术的正交验证，PAIA技术的检测准确性得到充分保障，为研发决策提供了可靠的数据支持。同时，其兼容粗上清液检测的特性，进一步简化了实验流程，缩短了研发周期，促进了细胞株开发和上游工艺开发团队的高效协作。

未来，随着技术的不断完善，PAIA技术有望扩展到更多类型的生物分子和糖基化物种检测中，为生物药研发提供更全面、更高效的质量控制解决方案，助力更多优质生物药更快走向市场，惠及全球患者。泉心泉意是PAIA biotech在中国区的独家代理，更多信息欢迎您的咨询。