PAlA Biotech下期 | 抗体检测这么做，检测效果不再愁！

来源：

2024-12-24

前倾回顾

PAlA Biotech基于其专有微孔板技术开发的系列检测试剂盒推出系列产品。具体原理如下：

通过在中间突起的孔里预先加入微球。由于微孔板中间突起，因此在重力作用下微球位于孔板底部。向微孔中加入带有荧光集团的分子和待检测样本，并进行混匀。样本中的目标分子和荧光集团结合，与此同时微球和目标分子竞争荧光集团。

透过微孔板底部进行荧光分析，基于荧光值得大小即可判定样本中目标分子的多少。

上期给大家介绍了PAIA Biotech系列试剂盒是两大应用场景：抗体滴度检测及糖基化分析（点击可查看详情），本期将继续为大家介绍PAlA Biotech系列试剂盒在抗体错配分析、聚集程度检测、表面疏水性检测、表面电荷检测、多特异性检测、胞饮作用检测中的应用。

应用场景三：抗体错配检测

01 原理分析

在生物制药和抗体药物开发过程中，抗体错配（mismatch）是一个常见的问题，尤其在抗体筛选、生产和质控阶段。

PAIA Biotech的试剂盒，同样借助中间突起的微孔板，基于在不同的PH的情况下，错配和正确配对的抗体，他们对离子交换磁珠的结合能力是不同的为原理，因此会显示出不同的荧光读数量，依次判定样本中抗体的错配情况。

02 传统的抗体错配检测方法

传统方法主要包括ELISA（酶联免疫吸附法）、HPLC（高效液相色谱法）和SPR（表面等离子共振法）等技术。每种方法的检测原理和操作流程各不相同，具体如下：

1 ELISA（酶联免疫吸附法）

1. 原理：ELISA利用抗原-抗体的特异性结合反应，在微孔板上对抗体的结合能力进行检测。通常，靶抗原会被固定在微孔板的底部，当加入抗体样品后，特定的抗体会与抗原结合。为了检测这种结合反应，加入与抗体结合的标记二抗（通常是HRP标记的二抗）。通过加入底物（如TMB溶液）并在特定条件下显色，显色强度与结合的抗体数量成正比

2. 操作流程：包被抗原 → 封闭 → 加入样品 → 加入二抗 → 显色反应 → 终止反应 → 读板检测

3. 优点：灵敏度高、操作设备简单，适用于大规模样品筛选和质控检测

4. 缺点：操作步骤繁琐，检测时间较长（3-5小时），需要多次洗涤，容易出现假阳性或假阴性

2 HPLC（高效液相色谱法）

1. 原理：HPLC是一种基于分子尺寸、极性或电荷差异的分离检测技术。样品在高压泵的推动下通过固定相填充的色谱柱，不同成分因物理化学特性的不同，在色谱柱中被分离。HPLC可以分离和检测不同的抗体亚型、抗体聚集体和杂质等，从而区分抗体错配现象

2. 操作流程：样品前处理 → 进样 → 通过色谱柱分离 → 通过检测器检测（如紫外/荧光检测器） → 数据记录与分析

3. 优点：灵敏度高，适用于检测抗体分子量、纯度、聚集体及其结构差异

4. 缺点：操作复杂，样品前处理繁琐，检测时间较长（2-4小时），设备成本高，难以实现高通量检测

3 SPR（表面等离子共振法）

1. 原理：SPR是一种实时监测分子间相互作用动力学的技术，基于光在金属界面反射时的表面等离子体共振现象。检测时，将一种分子（如抗原）固定在金属表面，另一种分子（如抗体）通过流动样品与之结合。分子结合引起表面折射率的变化，SPR传感器记录到的共振角变化与分子结合的数量成正比，从而监测到结合的抗体

2. 操作流程：抗原固定 → 流动样品（抗体）注入 → 动态实时监测分子结合情况 → 数据记录与分析

3. 优点：实时检测、动态监测，灵敏度高，能提供结合动力学数据（如Ka、Kd）

4. 缺点：设备昂贵，操作复杂，样品用量大，难以高通量处理

03 PAIA Biotech检测试剂盒与传统方法的对比总结

总的来说，PAIA Biotech的检测技术在高通量、快速、简单操作等方面具有较大优势，特别适合用于大规模的抗体错配检测。与传统的ELISA和HPLC方法相比，PAIA检测大大缩短了检测时间，降低了操作复杂性，并且对高通量的抗体筛选和生产环境更加友好。

应用场景四：抗体聚集分析

抗体聚集体的产生可能会影响药物的安全性、稳定性和有效性。抗体药物开发，质量控制（QC），工艺优化流程都需要进行抗体聚集检测分析。

01 原理分析

PAIA Biotech的抗体聚集检测采用了荧光微孔板检测技术，其核心原理是利用特异性配体（如捕获抗体或结合分子）在微孔板中捕获抗体聚集体，并通过荧光标记的二抗对其进行可视化检测。将抗体样品加入特定配体包被的微孔板中，聚集体会优先与捕获分子结合，入荧光标记的二抗，二抗与捕获的抗体聚集体结合，产生可检测的荧光信号，荧光检测仪对每个孔的荧光强度进行读取，荧光强度的高低与抗体聚集体的数量成正比。

02 传统的抗体聚集分析方法及其局限性

传统的抗体聚集检测方法主要包括SEC-HPLC（凝胶过滤色谱法）、DLS（动态光散射）和AUC（分析超速离心）等。这些方法的原理和检测特点如下：

1 SEC-HPLC（凝胶过滤色谱法）

1. 原理：SEC-HPLC利用抗体分子的分子大小差异进行分离，较大的分子（聚集体）会更早从色谱柱中流出，而较小的单体则滞后流出，从而实现分离和检测

2. 局限性：

● 检测速度慢，通常每个样品检测需要30分钟到1小时

● 样品前处理复杂，需要脱气、过滤等操作，增加了人力成本

● 高压操作可能破坏天然的抗体聚集体，造成检测偏差

2 DLS（动态光散射）

1. 原理：DLS是通过分析样品中颗粒的布朗运动速率，计算出颗粒的粒径分布。抗体聚集体的体积比单体更大，光的散射强度也更高，因此可通过散射信号区分抗体单体和聚集体

2. 局限性：

● 对高浓度样品不敏感，高浓度的蛋白溶液容易引发多重散射效应，导致数据不准确

● 只适用于检测较大的颗粒，无法区分微小的抗体二聚体或寡聚体

● 只能测量体积信息，无法获得抗体的定量信息

3 AUC（分析超速离心）

1. 原理：AUC通过在高离心力下将样品中不同质量的分子分离，抗体单体、二聚体和更高聚集体会分离成不同的带

2. 局限性：

● 检测设备昂贵，操作复杂，通常需要经过专门培训的人员操作

● 检测过程耗时长达6-8小时，不适合高通量分析

● 只能在低样品通量下操作，无法应对大规模样品检测需求

03 PAIA Biotech的抗体聚集检测优势

与传统的抗体聚集分析方法相比，PAIA Biotech的检测方案在速度、成本和通量方面具有显著的优势。

1. 检测速度快：与SEC-HPLC和AUC相比，PAIA检测通常在1小时内完成，可大幅缩短检测时间

2. 高通量检测：PAIA检测平台支持96孔和384孔板，实现批量检测，而SEC-HPLC和AUC只能单样品逐一检测

3. 无需洗涤，自动化程度高：PAIA检测过程不需要洗涤步骤，自动化平台可快速操作，节省人力和时间成本

4. 灵敏度高：可检测到pg/mL级别的抗体浓度，尤其适用于早期药物筛选和大规模质控

5. 简单的设备要求：与SPR和AUC所需的昂贵设备不同，PAIA只需标准的荧光微孔板检测仪，维护成本低、便于操作

04 PAIA Biotech检测试剂盒与传统方法的对比总结

应用场景五：抗体表面疏水性检测、

表面电荷检测、多特异性检测、胞饮作用检测

PAIA Biotech同样基于荧光微孔板检测技术，开发了抗体表面疏水性检测，抗体表面电荷检测，抗体多特异性检测，抗体胞饮作用检测系列试剂盒。我们以抗体表面疏水性检测，抗体表面电荷检测为例，进行相关产品介绍。

01 抗体表面疏水性检测

首先在抗体表面疏水性检测方面，抗体表面疏水性的评估对于预测抗体的聚集风险、稳定性和可开发性至关重要。传统的检测方式有反相高效液相色谱（RP-HPLC），表面等离子体共振（SPR），疏水相互作用色谱（HIC, Hydrophobic Interaction Chromatography）等。与传统方式相比，PAIA biotech产品具有如下优点：

1. 高通量：

● 支持96孔/384孔板操作，一次可同时检测数十至上百个抗体样品

● 与传统的HPLC、SPR、HIC方法相比，检测速度更快，适合大规模的抗体库筛选

2. 快速检测，1小时内完成：

● 传统HPLC和HIC方法需要几个小时，而PAIA方法在1小时内即可完成检测，节省时间成本

3. 无需复杂仪器，操作简单：

● 不需要使用HPLC、SPR等昂贵的精密仪器，只需普通的荧光检测仪，大大降低了设备和维护成本

4. 无洗涤操作，节省人力：

● 传统的疏水性检测（如HIC）需要多步洗涤和洗脱，而PAIA的检测方案不需要洗涤操作，大大减少了操作步骤和人工干预

5. 检测灵敏度高，结果稳定：

● 与传统的ANS荧光染料法相比，PAIA的荧光标记技术更加敏感，能够检测到更小的疏水性差异，结果可重复性更高

6. 样品用量少，节约成本：