写在前言
荧光报告细胞系是开展大规模药物筛选以及药物靶点筛选和机制功能研究的强大工具,通过高通量、高灵敏度的荧光检测,可以提高筛选的效率以及准确性,从而加速药物研发进程,为新药研发提供有力的支持。
接下来我们将从荧光报告细胞系的检测原理、用途以及构建过程等方面进行详细介绍。
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Luciferase荧光报告细胞系检测原理及用途
当细胞内的特定信号通路被激活或抑制时,目标基因的表达水平会发生相应的变化,进而导致荧光素酶的表达量也随之改变。通过检测荧光素酶的荧光强度,可以实时、定量地了解基因表达的调控情况,主要用途为:
基因表达分析:启动子活性研究、转录因子活性检测、基因沉默与RNA干扰(RNAi)研究
信号转导通路研究:细胞内信号通路分析、细胞因子和激素作用研究
药物筛选与药理学研究:药物活性筛选、药物毒性和安全性评估、药物作用机制研究
Luciferase荧光报告细胞系的构建
Luciferase Reporter Cell Lines报告细胞系是通过将荧光素酶(Luciferase)基因插入到细胞的特定基因表达调控元件下游而构建的,主要包括以下几个构建步骤:
选择合适的宿主细胞系:选择合适的细胞系作为宿主细胞,这些细胞系应具有良好的生长特性、易于培养和操作,并且对实验处理具有一定的耐受性。
构建报告基因载体:利用基因工程技术,将荧光素酶基因与目标基因的启动子或增强子等调控元件连接起来,构建报告基因载体。
病毒介导转入:通过AAV病毒介导或转染等方法将报告基因载体导入宿主细胞中,使荧光素酶基因在细胞中稳定表达。
荧光检测试剂盒筛选并验证稳定表达的报告细胞系:筛选出成功构建的报告细胞系,并对其进行功能验证,确保其能够准确反映目标基因的表达情况。
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