EN 在线商城
泉心泉意 新闻中心
NEWS CENTER
ELISPOT技术,精准捕捉单个细胞分泌活性的“指纹”
来源: 2025-11-27 46

01 从ELISA到ELISPOT

——让单个细胞的声音被“看见”


在免疫学研究中,传统的 ELISA技术能测出细胞群体分泌的细胞因子或抗体的平均水平,但它无法回答一个更细致的问题——究竟是哪些细胞在发挥作用?每个细胞的分泌能力又有多强?
ELISPOT技术(Enzyme-Linked ImmunoSpot 正是为了解决这个问题而诞生,其目的是为了捕获样本细胞在动态刺激过程中新鲜分泌的蛋白。


ELISPOT以单个细胞为检测单位,通过在膜底预包被特异性抗体,捕获每个细胞分泌出的细胞因子或抗体。随后,经过酶反应显色后,细胞分泌的蛋白在膜上留下一个个清晰的斑点”——每一个斑点代表一个分泌活跃的细胞,而斑点大小与颜色深浅则对应了该细胞的分泌量。

 ELISPOT
检测
T
细胞分泌活性

02 关于ELISPOT技术的工作流程

1. 预包被抗体:将特异性抗体预包被在96孔板的PVDF或硝酸纤维素膜上,用于捕获目标蛋白;

2. 细胞培养与刺激:将待检测细胞加入孔板中,并用抗原或刺激物激活细胞,使其分泌目标蛋白。

3. 蛋白捕获:分泌的蛋白被孔板底部的抗体捕获并固定。

4. 检测抗体:加入与目标蛋白特异性结合的二抗(通常与酶结合),形成抗体复合物。

5. 显色反应:加入底物后,酶催化反应生成可见的色斑或荧光斑点每个斑点代表一个分泌目标蛋白的单细胞。

6. 计数与分析:使用lmmunospot分析仪对斑点进行计数和分析,从而评估细胞的活性和分泌能力。


 
Elispot检测流程示意图
CTLCellular Technology Limited) 的 ImmunoSpot ELISPOT/FluoroSpot 平台将这一过程推向极致,可以提供一套完整的套装,包含捕获和检测抗体、酶或荧光检测试剂、稀释缓冲液、无血清T细胞检测培养基以及PVDF膜板。CTLImmunoSpot ELISPOT技术具有如下优势:
  • 检测分辨率高——细胞水平,可用于检测单个细胞的活性

  • 超高灵敏度——可检测百万分之一的阳性细胞,检测灵敏度达传统ELISA的百倍级;

  • 无批次效应——ImmunoSpot试剂盒经过标准化和优化,具有较高的可靠性和可重复性;

  • 多因子检测——FluoroSpot 技术可在一次实验中同时检测 2–4 种细胞因子;

  • 智能化图像分析——软件自动识别并定量分析每个斑点的位置、大小与密度,实现精准、客观的统计结果


ELISPOT这一技术让研究者得以从单个细胞层面洞察免疫系统的真实反应,为疫苗研发、免疫治疗评估、自身免疫疾病研究提供了不可替代的研究手段。


03 为什么需要ELISPOT?

——聚焦“谁”在发挥免疫作用

在免疫系统中,抗体只是反应的结果,而真正驱动免疫应答的,是细胞本身。尤其在研究细胞免疫(Cell-mediated Immunity时,我们更需要了解的不是体液中抗体的总量,而是:
  • 到底有多少免疫细胞被激活?

  • 哪些细胞在分泌关键的细胞因子?

  • 每个细胞的分泌能力有多强?

ELISPOT 技术的独特价值,就在于其能在单细胞分辨率精确捕捉免疫应答的第一现场,通过分析定性定量单个斑点的数量、大小与密度,判断有多少细胞在发挥功能,同时评估它们分泌因子的强弱与活性水平


目前,随着免疫疗法与疫苗研发的飞速发展,全球监管机构也日益重视细胞免疫相关数据。在药物与疫苗的临床申报中,FDA(美国食品药品监督管理局) 已明确要求企业提供T细胞免疫应答等功能性检测数据,以验证候选药物或疫苗能否真正激活细胞免疫系统。ELISPOT/FluoroSpot 技术已成为最常用、最具认可度的实验方法之一,尤其IFN-γ ELISPOT检测方法,更是成为评估疫苗引起的细胞免疫效应的“金标准”。总之,无论是疫苗免疫原性验证、肿瘤免疫疗法评估,还是自身免疫疾病与感染研究,ELISPOT都不再只是一项科研工具,而是成为了基础研究到临床转化的关键桥梁


04 CTL——从技术奠基者到全球标准制定者

ELISPOT 技术的发展中,CTLCellular Technology Limited 是绕不开的名字。这家来自美国克利夫兰的企业,由免疫学家 Alexander Sette 博士与Paul Lehmann 博士创立,他们是全球最早期将ELISPOT 技术商业化、并建立自动化检测系统的团队。从最初的手动膜板,到如今全自动的ImmunoSpot平台,CTL几乎定义了这一领域的技术标准。

4.1 品牌产品体系与特色
  • ImmunoSpot® Reader 系统
    该系统是全球首款专为 ELISPOT/FluoroSpot 设计的图像识别与数据分析平台,可自动识别每个显色斑点的数量、位置、大小和光密度,实现定量化、可追溯的数据输出。
  • 目前在中国的科研与工业用户中,装机量已接近 400 ,覆盖高校、研究院、CRO 及疫苗、生物药企。
  • ELISPOT/FluoroSpot 试剂盒
    配方稳定、灵敏度高,可用于检测多种细胞因子,如 IFN-γIL-2IL-4IL-5Granzyme B 等。FluoroSpot 技术支持多因子检测,为复杂免疫应答提供更立体的视角。
  • 验证合格的 PBMC(外周血单个核细胞)


CTL 提供经过严格质控的人源 PBMC 细胞,作为阳性参考样本,与其试剂配套使用,帮助科研人员在实验中快速建立对照体系,获得更稳定、可比性更强的数据结果。


4.2 泉心泉意助您高效采购CTL,深度链接厂家
当前CTL产品已经在泉心商城上线!泉心泉意不仅可以为您采购CTL全系列产品,更能提供深度对接厂家技术支持——无论是仪器安装、操作培训,还是实验方案优化、数据解析,都可获得一站式售后服务保障,让科研与工业客户用得安心、高效。
更多信息,欢迎扫描下方二维码咨询↓↓↓:
泉心泉意云智慧供应
赋能生命科学成长

- END -

关于泉心泉意



泉心泉意(上海)生命科技有限公司是生物医药行业的云智慧供应链平台,深度结合SaaS化电商架构,提供线上线下一体化SPM采购供应整合服务,同时泉心泉意也通过多年的积累推出了自有品牌“泉品”,布局高品质的国产试剂、耗材及实验室仪器等。


泉心泉意致力为生物医药人打造“迅捷、专业、可靠”的供应链,广泛覆盖和渗透生物医药集群,涵盖早期发现、CMC、临床、生产等生物医药全生命周期。泉心泉意总部位于上海,并在北京、苏州、成都、广州、杭州、佛山均设有营销及仓储中心。








↓↓↓
 
点击阅读原文,

一键直达泉心线上商城