写在前言

在免疫检测研究中，Elisa、HTRF（Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）可以家常便饭般的存在，无论是基础科研，还是药物研发，临床测试，怕都少不了这位神通广大者的存在。然而，即使这般存在，当面对众多繁杂的实验环节中的复杂步骤、反复洗板，冗长的实验周期等因素，也让各位科研工作er叫苦连天。那么是否有一些技术可以不洗板，就实现快速检测，同时达到较高的灵敏度呢？

答案当然是Yes。ALPHA（Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay）和HTRF都是大神级存在，检测效果秒杀Elisa，那么这位大神有哪些大招呢？

简单概括就是，灵敏度检测低至飞克级，动态范围覆盖4-5个数量级，无需洗涤和清晰。但其是如何实现的呢？接下来我们就细细的唠一下。不过在此之前，请允许小编先发个小福利。

ALPHA（Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay）即均相发光法，是高通量药物筛选的重要手段之一。该方法由供体微球和受体微球两种微球组成，当两个微球达到足够接近距离时（＜200nm），能够检测出发光信号。

供体微珠包含光敏剂，在680nm激光下，其周围的氧分子转化为一种高能活跃的氧状态-单体氧，供体微球可以产生60,000左右的单体氧，单体氧在溶液中扩散高达200nm的距离，该单体氧能够出发该范围内受体微球的二甲基噻吩衍生物，通过一系列的化学反应产生光强度，从而达到检测的目的。而当待测物种不含待测蛋白的时候，免疫复合物无法形成，两个微球间距＞200nm，超出单线态氧的传递距离，则受体微球保护产生发射光，没有荧光信号的产生。

操作简便：采用均相检测流程，无需洗涤或分离步骤。

检测快速：多数应用中 3小时内出结果。

灵敏度高：单线态氧可产生60000个/s，扩散直径在200nm，信号强，可检测低至飞克级(femtogram)检测物。

动态范围广: 可覆盖4-5 个数量级。

样本兼容性强：适用于血清、血浆、脑脊液(CSF)、组织提取物、细胞培养上清液、细胞裂解液等多种样本类型。

ALPHA在检测细胞因子、信号分子等方面有广泛的应用，可用于各种血清标记物检测（心肌标志物、感染标志物、肿瘤标志物等），外泌体检测，蛋白间相互作用研究，药物筛选，细胞信号通路研究，激酶及酶活力测定等领域。

HTRF（Homogeneous Time-Resolved Fluorescence） 技术是一种结合了荧光共振能量转移（FRET）和时间分辨荧光（TRF）的检测技术。 其核心原理是利用稀土元素（如铕 Eu、铽 Tb 等）的荧光特性，这些元素的荧光半衰期长达毫秒级，远高于普通荧光的纳秒级。在检测时，通过延缓检测时间，让短寿命的背景荧光衰变掉，再检测稀土元素的荧光强度，从而消除背景干扰。

• 均相免洗：无需洗板，操作简便，快速操作，提高筛选通量。

• 结合稳定：信号稳定，可以去除背景荧光，数据客观真实。

• 操作简单：空板直接加样，加完即可检测，精简操作流程至2小时（加样+孵育）。

  
  

  
  

• 适合珍贵样本：样本低至20ul，体系稳定，七天内可随时检测，信号基本不变。

  
  

  
  

HTRF技术适用于需要高稳定性、高特异性检测的场景，可用于GPCR、激酶活性、生物标志物、细胞因子检测、抗体检测、免疫过程分析、免疫检查点检测、互作分析、蛋白修饰等检测。

总之，无论是Alpha还是HTRF，都可以用于药物研发、分子互作研究领域。目前，具有飞摩尔级检测范围的Alpha技术已经被越来越多的Top药企青睐，泉心泉意代理的国产Alpha均相检测技术，克服“卡脖子”技术，打破国产不稳定的性能魔咒，产品性能稳定，且具有免清洗，便捷高效以及较宽检测范围的特点。

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